一、染色原理

1、番红O的染色原理：

番红O是一种从藏红花柱头中提取的天然染色剂，为橙红色粉末。它是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（如硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。

番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。

2、固绿的染色原理：

固绿是深绿色粉末或带金属光泽的颗粒。它是一种酸性染料，能溶于水和酒精。

固绿主要用于染含有浆质的纤维素细胞组织，如与软骨下骨胶原纤维结合，呈现绿色且不易褪色。

二、材料与仪器：

实验试剂：

无水乙醇、二甲苯、中性树胶、改良番红O-固绿软骨染色试剂盒

实验仪器：

LEiCA TP-1020脱水机、LEiCA HistoCore MULTICUT病理切片机、包埋机、冻台、组织摊片机、烤箱、载玻片、盖玻片、OLYMPUS CKX43-LP显微镜、3DHISTECHP250FLASH全景扫描仪

三、实验步骤：

1、 石蜡切片脱蜡至水：

依次将石蜡切片放入

❶二甲苯Ⅰ20min❷二甲苯Ⅱ20min

❸无水乙醇Ⅰ3min❹无水乙醇Ⅱ3min

❺90%乙醇3min❻80%乙醇3min

❼70%乙醇3min❽蒸馏水洗

2、固绿染色：

将切片放入固绿染色液内浸染5min，快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿，晾干。

3、番红染色：

将切片放入番红染色液内浸染5min。

4、脱水：

将切片按95%乙醇2-3s、无水乙醇2-3s，无水乙醇1min脱水。

5、透明封固：

切片放入二甲苯中透明，中性树胶封片。

实验结果：

嗜碱性的骨与碱性染料番红O结合呈现红色。

嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合呈现绿色。

文章出自：番红固绿染色实验      想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/